Yersinia massiliensis (Enterobacteriales: Enterobacteriaceae) in the host Anaphes nitens (Hymenoptera: Mymaridae): first report of association with insects / Yersinia massiliensis (Enterobacteriales: Enterobacteriaceae) no hospedeiro Anaphes nitens (Hymenoptera: Mymaridae): primeiro relato de associação com insetos

Endosymbiont bacteria can affect biological parameters and reduce the effectiveness of natural enemies in controlling the target insect. The objective of this work was to identify endosymbiont bacteria in Anaphes nitens (Girault, 1928) (Hymenoptera: Mymaridae), the main natural enemy used to manage Gonipterus platensis (Marelli, 1926) (Coleoptera: Curculionidae). Genomic DNA from six A. nitens populations was extracted and polymerase chain reactions (PCR) were performed with the primers to detect endosymbiont bacteria in this insect. The PCR products were amplified, sequenced, and compared with sequences deposited in the GenBank for the bacteria identification. All A. nitens populations had the bacterium Yersinia massiliensis (Enterobacteriales: Enterobacteriaceae). This bacterium was originally described as free-living, and it is associated with and composes part of the A. nitens microbiota. This is the first report of Y. massiliensis in an insect host.

As bactérias endossimbiontes podem afetar os parâmetros biológicos e reduzirem a eficácia de inimigos naturais no controle do inseto alvo. O objetivo deste trabalho foi identificar bactérias endossimbiontes em Anaphes nitens (Girault, 1928) (Hymenoptera: Mymaridae), o principal inimigo natural usado no manejo de Gonipterus platensis (Marelli, 1926) (Coleoptera: Curculionidae). O DNA genômico de seis populações de A. nitens foi extraído e as reações em cadeia da polimerase (PCR) realizadas com os primers para detectar bactérias endossimbiontes neste inseto. Os produtos de PCR foram amplificados, sequenciados e comparados com as sequências depositadas no GenBank para identificação das bactérias. Todas as populações de A. nitens tinham a bactéria Yersinia massiliensis (Enterobacteriales: Enterobacteriaceae). Esta bactéria foi originalmente descrita como de vida livre e está associada e compõe parte da microbiota de A. nitens. Este é o primeiro relato de Y. massiliensis em um hospedeiro.

Sequence analysis of the internal transcribed spacer 2 (ITS2) region of rDNA for identifying Trichogramma species and evaluating genetic diversity / Análise de sequência do rDNA da região espaçadora do transcrito interno 2 (ITS2) para identificar espécies de Trichogramma e avaliar a diversidade genética

Abstract Species of Trichogramma Westwood, 1833 (Hymenoptera: Trichogrammtidae) are frequently used as biological control agents against Lepidoptera, but practical application of these egg endoparasitoids are complicated because of their complex taxonomy. This study aimed to compare sequences of internal transcribed spacer regions of ribosomal DNA (ITS2-rDNA) of Trichogramma accessions with those deposited in GenBank in order to access the reliability of the ITS2 as a barcode for discriminating species and evaluating the genetic diversity. ITS2-rDNA sequences obtained from seventeen specimens of Trichogramma confirmed previous identifications based on morphological characteristics. Multiple sequence alignment revealed the existence of highly conserved regions in ITS2 sequences while the neighbour-joining dendrogram indicated that the specimens formed three clusters comprising T. manicobai and T. marandobai (group I), T. galloi (group II) and T. pretiosum (group III). The ITS2 marker was shown to be a powerful DNA barcode for discriminating Trichogramma species and could be used to complement the morphological approach.

Resumo Espécies de Trichogramma Westwood, 1833 (Hymenoptera: Trichogrammatidae) são freqüentemente usadas como agentes de controle biológico contra Lepidoptera, esses endoparasitóides de ovos apresentam taxonomia complexa, o que dificulta sua aplicação prática. Este estudo teve como objetivo comparar seqüências de regiões espaçadoras internas transcritas de DNA ribossômico (ITS2-rDNA) de acessos de Trichogramma com aquelas depositadas no GenBank, a fim de avaliar a confiabilidade do ITS2 barcode para discriminar espécies e avaliar a diversidade genética. As seqüências de ITS2-rDNA obtidas de dezessete espécimes de Trichogramma confirmaram identidades anteriores com base em características morfológicas. O alinhamento de múltiplas sequências revelou a existência de regiões altamente conservadas nas sequências ITS2, enquanto o dendrograma indicou que os espécimes formavam três grupos compreendendo T. manicobai e T. marandobai (grupo I), T. galloi (grupo II) e T. pretiosum (grupo III). O marcador ITS2 mostrou ser um poderoso DNA barcode para discriminar espécies de Trichogramma podendo ser usado como complemento da abordagem morfológica.

Molecular identification of Trichogramma species from regions in Brazil using the sequencing of the ITS2 region of ribosomal DNA / Identificação molecular de espécies de Trichogramma de regiões do Brasil utilizando o sequenciamento da região ITS2 do DNA ribossomal

The objective of this work was the identification and differentiation of Trichogramma exiguum Pinto and Platner species, T. pretiosum Riley, and T. galloi Zucchi using sequences of the ITS2 region of ribosomal DNA. After extracting DNA from the studied species, a PCR reaction was performed, where the amplified samples were subjected to sequencing. The sequences obtained were submitted to a similarity search in GenBank (NCBI - National Center for Biotechnology Information) using the BLAST program, aiming to determine the similarity of these sequences with the species already deposited in the referenced database, and then multiple sequences were aligned using version 2.0 of the ClustalX program. According to the results of the multiple alignments of all sequences obtained, it was possible to observe the differences between the T. pretiosum, T. galloi and T. exiguum species. It was concluded that using the sequences of the ITS2 region of the ribosomal DNA was efficient in the differentiation of the studied Trichogramma species, which suggests a strong inter-specific variation among species.

O objetivo deste trabalho foi realizar a identificação e diferenciação das espécies Trichogramma exiguum Pinto e Platner, T. pretiosum Riley e T. galloi Zucchi utilizando o sequenciamento da região ITS2 do DNA ribossomal. Após a extração do DNA das espécies estudadas, foi realizada a reação de PCR, onde as amostras amplificadas foram submetidas ao sequenciamento. As sequências obtidas foram submetidas à busca por similaridade no GenBank (NCBI – National Center for Biotechnology Information) por meio do programa BLAST visando-se determinar a similaridade destas com sequências das espécies já depositadas no referido banco de dados e em seguida foi feito o alinhamento múltiplo das sequências com o auxílio do programa CLUSTALX, versão 2.0. De acordo com os resultados do alinhamento múltiplo de todas as sequências obtidas, foi possível verificar as diferenças entre as espécies de T.pretiosum, T. galloi e T. exiguum. Isto permitiu concluir que a utilização do sequenciamento da região ITS2 do DNA ribossomal foi eficiente na diferenciação das espécies de Trichogramma estudadas, o que sugere uma forte variação inter-específica entre as espécies.

Detection of diploid males in a natural colony of the cleptobiotic bee Lestrimelitta sp (Hymenoptera, Apidae)

When working at quantifying the genome size of stingless bees, it was observed that males of Lestrimelitta sp possessed the same amount of nuclear DNA as the females. Thus, we used flow cytometry (FCM) and cytogenetic analysis to confirm the ploidy of these individuals. The males analyzed proved to be diploid, since, through cytometric analysis, it was demonstrated that the mean genome size of both males and females was the same (C = 0.463 pg), and, furthermore, cytogenetic analysis demonstrated that both had 2n = 28 chromosomes.

RAPD variation within and among species of Melittobia Westwood (Hymenoptera: Eulophidae)

O gênero Melittobia Westwood compreende várias espécies de microparasitóides, das quais apenas duas foram registradas no Brasil até agora: M. australica Girault e M. hawaiiensis Perkins. Entretanto, essas espécies são de difícil identificação através de métodos taxonômicos tradicionais. No presente trabalho, marcadores moleculares amplificados ao acaso (PCR-RAPD) foram utilizados com o objetivo de se discriminar as duas espécies e, ao mesmo tempo, analisar a variabilidade genética em populações de M. australica. A maioria dos fragmentos gerados foi espécie-específicos estando presente em todos os indivíduos de uma espécie e ausente nos indivíduos da outra espécie, demonstrando a adequação dessa técnica na distinção das espécies de Melittobia estudadas. A técnica de PCR-RAPD também demonstrou que os indivíduos das diferentes populações estudadas são muito semelhantes entre si, o que pode ser atribuído ao efeito fundador e/ou a grande capacidade de dispersão dessas populações. As distâncias genéticas dentro (D = 1,19-3,54%) e entre as populações (D = 1,93-5,28%) de M. australica apresentaram valores muito baixos, refletindo a reduzida variação genética existente nas populações dessa espécie.

Dissimilaridade genética de linhagens de Trichogramma Westwood (Hymenoptera: Trichogrammatidae) através de marcadores moleculares ISSR / Genetic dissimilarity of lines of Trichogramma Westwood (Hymenoptera: Trichogrammatidae) through ISSR markers

A demanda por processos agrícolas racionais, em detrimento da utilização de estratégias convencionais, tem contribuído para o desenvolvimento de técnicas de controle biológico, como a utilização de parasitóides de ovos do gênero Trichogramma Westwood. Um entrave para sua utilização é a dificuldade na identificação das espécies, devido ao diminuto tamanho e à similaridade morfológica. Os marcadores moleculares acessam o genoma, evitando o efeito ambiental e conseqüentemente erros de identificação. Várias técnicas estão disponíveis e a técnica ISSR vem sendo empregada para a diferenciação rápida entre indivíduos próximos, devido ao elevado grau de polimorfismo, reprodutibilidade e baixo custo. Este trabalho objetivou mensurar o nível de diferenciação genética de linhagens de Trichogramma, mediante o emprego da técnica de ISSR. Cinco linhagens foram estudadas: três da espécie T. pretiosum Riley, uma da espécie T. atopovirilia Oatman & Platner e uma da espécie T. bruni Nagaraja. A identificação morfológica dos parasitóides foi realizada na ESALQ/USP, Piracicaba, SP. Após a extração do DNA e sua padronização, realizaram-se as reações de PCR utilizando-se 26 marcadores ISSR, dos quais 11 foram selecionados por apresentarem maior polimorfismo e consistência. Os dados moleculares foram transformados em matriz binária e analisados pelo programa estatístico NTSYS v. 2.1. Os 11 marcadores utilizados geraram 172 bandas polimórficas. A similaridade genética variou de 19 por cento a 96 por cento, permitindo concluir que a técnica ISSR é eficiente na identificação de polimorfismo de DNA em Trichogramma. Além disso, os resultados sugerem uma variação acentuada inter e intra-específica.

Demands for sustainable agricultural systems have forested the development of biological control techniques, such as the use of the egg parasitoid Trichogramma Westwood. However, the arduous identification of the parasitoid at the species level, due to the tiny size and the morphological similarities is an obstacle to increasing its use. Molecular markers are useful to reach the specimen genome and avoid environmental effects that could misguide identification. Several molecular markers techniques are available and the ISSR technique has been used to differentiate close individuals, due to its high polymorphism level, reproducibility and low cost. The objective of this study was to measure the level of genetic differentiation among five lines of Trichogramma, using ISSR markers: three belonging to the species T. pretiosum Riley, one to T. atopovirilia Oatman & Platner and one to T. bruni Nagaraja. Morphological identification of the parasitoids was conducted at ESALQ/USP - Piracicaba, SP. After DNA removal and standatization, PCR reactions were performed with 26 ISSR primers; 11 of them were selected because they presented greater polymorphism and consistency. Molecular data were converted into a binary matrix and analyzed (NTSYS v. 2.1). The 11 primers produced 172 polymorphic sections. Genetic similarity ranged from 19 percent to 96 percent, showing that the ISSR technique can efficiently identify DNA polymorphism in Trichogramma. Results also indicate important inter and intra-specific variations among the parasitoid lines.

Foraging patterns in a nocturnal swarm-founding wasp, Apoica flavissima van der Vecht (Hymenoptera: Vespidae)

Foraging behaviour has a remarkable significance to colonies of social insects since it is directly related to the supply of food, water, and pulp. Social wasps of the genus Apoica Lepeletier are primarily nocturnal, but studies concerning the general aspects related to this habit are still scarce. This study showed that the rates of foraging flights were higher during the full moon and last quarter moon phases. Frequencies of arrival and departure were correlated with time and temperature at night. The results suggest that the moonlight is an important component to general activities in this genus.

O comportamento de forragear é fundamental para o desenvolvimento das colônias de insetos sociais, pois permite que as colônias sejam supridas de alimento, água e materiais utilizados para a construção dos ninhos. Vespas sociais do gênero Apoica Lepeletier (Hymenoptera: Vespidae) têm comportamento de forrageamento noturno como uma de suas principais características, porém estudos sobre aspectos abióticos que influenciam esse comportamento são ainda escassos. Este estudo mostra que a freqüência de forrageamento foi maior em noites de luas cheia e crescente. Além disso, as saídas e retornos ao ninho correlacionaram-se positivamente com o período da noite e a temperatura. Os resultados sugerem que a luminosidade é um componente importante nas atividades gerais das colônias do gênero.

Espécies novas de Centris Fabricius (Hymenoptera, Apoidea) / New species of Centris Fabricius (Hymenoptera, Apoidea)

Three new species of Centris Fabricius, 1804 are described: C. (Melacentris) melanosara sp. nov. (Viçosa-MG, Brazil), C. (Ptilotopus) melampoda sp. nov. (Manaus-AM, Brazil), and C. (Ptilotopus) erythrotricha sp. nov. (Pucallpa, Peru). Centris (Melacentris) frieseana nom. nov., a new name given to Centris friesei Ducke, 1902, non Schrottky, 1902. Comments and comparison between C. (Melacentris) rhodoprocta Moure & Seabra, 1961 and C. (Ptilotopus) nobilis Westwood, 1840, are given. All the species are figured.

The karyotype of the parasitoid Chenolus insularis Cresson (Hymenoptera, Braconidae, Cheloninae)

The karyotype of Chelomus insularis (Hymenoptera, Braconidae, Cheloninae) is described. The males show an haploid number of fourteen chromosomes, confirming haplo-diploid sex determination. Comparisons of these results with karyotypes of other species of the same family were done and a possible mechanism involved in the karyotype evolution of this species is discussed.